昆蟲組織蛋白酶B（CTSB）ELISA試劑盒

產品簡介：

樣本類型：血清、血漿、組織、細胞上清或其他生物樣本

檢測方法：雙抗夾心法

儲藏及保存：2-8度，6個月

檢測原理：

將目標抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標準品或標本，其中的目標連接于固相載體上的抗體結合，然后加入辣根過氧化物酶標記的抗體，將未結合的抗體洗凈后再次*洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（O.D.值），計算樣品濃度。

產品內容：

實驗所需儀器及設備：

實驗操作流程：

第一步：試劑盒室溫平衡 30min ，然后從鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

第二步：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL。

第三步：樣本孔中加入待測樣本 50μL；空白孔不加。

第四步：除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

第五步：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。

第六步：每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

第七步：每孔加入終止液 50μL，15min 內，在 450nm 波長處測定各孔的 O.D 值。

注：

昆蟲組織蛋白酶B（CTSB）ELISA試劑盒

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

◆ 仔細閱讀說明書
◆ 檢查試劑盒標簽上的有效期。如果超過有效期，請勿使用。
◆ 按說明書確定所有試劑齊全（數量、體積）
◆ 標本制備要規范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。
短期內無法實驗者，注意低溫保存
◆ 準備好所有實驗額外所需物品， （比如移液器，試管，清洗器， 酶標儀）
◆ 按說明書將所用試劑平衡至室溫，根據檢測標本數量確定所需試劑的量
◆ 檢查試劑盒內每種試劑的貯存條件，保證所有試劑均按照試劑盒內說明書推薦的條件存儲。
◆ 檢查不穩定或者變質的試劑溶液（比如沉淀或變色）。有些試劑，比如標準品稀釋液或者檢測稀釋液，可能在設計時就含有沉淀物。所有試劑在滴入酶標板之前，必需充分混勻。而由于沉淀物的特性，在加入酶標板之前，必需不停攪拌。
◆ 保證充分的孵育時間和溫度。
◆ 切勿使用不同生產批號的試劑取代現有試劑或混合現有試劑。
◆ 在混合或溶解蛋白溶液時，避免泡沫產生。
◆ 在實驗開始之前，安排好實驗流程。
◆ 在實驗開始之前，清潔工作臺。
◆ 若有問題，應與我公司或代理商進行溝通。

我的標準曲線是平的或者是非線性的，這可能是由于什么原因引起的？
引起不理想的標準曲線的原因有很多，常見的原因例舉如下：
◆ 確定稀釋是否得當。
◆ 確定波長是否正確。
◆ 標準品和樣品必需在15-20分鐘內滴加入板內。（除非試劑盒內說明書特別說明）
◆ 檢查背景是否過高。
◆ 確定酶標板是否正確洗滌。 不恰當的洗滌可能會引起具有高背景的平直曲線。
◆ 在測定過程中重復讀板。在超過建議時間后讀板會導致錯誤的結果。
◆ 如果高的標準品的讀數超過了酶標儀的范圍，確定標準品是否正確溶解，孵育時間和溫度是否準確。
◆ 為保證實驗準確性請重復測定。
◆ 如果使用對照，對照的濃度必須在測定范圍內。
◆ 在檢測和孵育過程中確定試劑沒有被污染。
◆ 沒有任何信號的平直標準曲線可能是由于酶結合物或者底物沒有反應。 檢查各個操作過程
◆ 由于許多酶標儀的限制，因此建議標準品檢測由高向低做復孔。

我是否可以更改底物處理的方法？
◆ 如果反應物溶液需要混合，確保加入的反應物試劑體積正確并充分混合?；旌虾蟮娜芤罕匦柙?5分鐘內使用（化學發光檢測多4小時）。如果反應物混合得太早，則在容器中的顏色可能會發生變化。
◆ 如果底物是凍干品或片劑，則根據說明書中的方法用適當體積的稀釋液將其*溶解?；旌?后并在說明書中推薦的時間內使用。

我在移液的時候是否要按照一定的順序？
◆ 根據說明書中的順序進行移液操作。
◆ 高靈敏度檢測利用了放大系統。在底物孵育完成之后，按照加底物的順序依次加入放大試劑。
◆ 底物加完之后，輕拍酶標板使其充分混合。
底物有可能被污染嗎？
◆ 是的。如果測定時使用的是堿性磷酸酶或者辣根過氧化物酶標記的結合物，在測定時要注意避免污染。污染可能會導致產生超過酶標儀范圍的值。避免與金屬或氧化試劑接觸。使用新容器。
底物是否需要在黑暗環境中進行孵育？
◆ 不需要。不過在孵育過程中應避免陽光直射。

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